Relatamos o tratamento bem-sucedido de dois pacientes com hemorragia subaracnóidea complicada com grave falência respiratória e choque séptico refratário, utilizando, simultaneamente, ventilação em posição prona e hemofiltração de alto volume. Esses tratamentos de resgate permitiram que os pacientes superassem a grave situação sem complicações associadas ou efeitos deletérios na pressão intracraniana e de perfusão cerebral. A ventilação em posição prona é, hoje, um tratamento aceito para síndrome de desconforto respiratório agudo grave, e a hemofiltração de alto volume é um suporte hemodinâmico não convencional, que tem diversos mecanismos potenciais para melhorar o choque séptico. Neste artigo revisamos brevemente esses tratamentos e as evidências relacionadas. Quando outras terapias convencionais são insuficientes para proporcionar oxigenação e perfusão como parte do cuidado neuroprotetor básico dentro de limites seguros em pacientes com hemorragia subaracnóidea, esses tratamentos de resgate podem ser considerados caso a caso por uma equipe com experiência em cuidados críticos.

We report the successful treatment of two patients with aneurismal subarachnoid hemorrhage complicated by severe respiratory failure and refractory septic shock using simultaneous prone position ventilation and high-volume hemofiltration. These rescue therapies allowed the patients to overcome the critical situation without associated complications and with no detrimental effects on the intracranial and cerebral perfusion pressures. Prone position ventilation is now an accepted therapy for severe acute respiratory distress syndrome, and high-volume hemofiltration is a non-conventional hemodynamic support that has several potential mechanisms for improving septic shock. In this manuscript, we briefly review these therapies and the related evidence. When other conventional treatments are insufficient for providing safe limits of oxygenation and perfusion as part of basic neuroprotective care in subarachnoid hemorrhage patients, these rescue therapies should be considered on a case-by-case basis by an experienced critical care team.

El uso de gallinas para la producción de anticuerpos policlonales, reduce la intervención animal, obteniendo además una gran cantidad de anticuerpos. Las aves presentan mayor distancia filogenética entre sus antígenos y los de mamíferos ofreciendo altos porcentajes de anticuerpos específicos. La producción de anticuerpos requiere antígenos en cantidades considerables, por ello es creciente el uso de proteínas recombinantes para tales fines. No obstante, la obtención de proteínas en sistemas heterólogos conduce frecuentemente a la precipitación en agregados insolubles de limitada utilidad (cuerpos de inclusión). Este trabajo presenta una metodología para la producción de anticuerpos policlonales (IgYs) empleando cuerpos de inclusión (CI) como antígeno. Los CI purificados e inoculados corresponden a la Nicotinamida / Nicotinato Mononucleotido Adenililtranferasa (His-GiNMNAT) de Giardia intestinalis expresada en Escherichia coli. La purificación del antígeno se llevó a cabo mediante solubilización y renaturalización. Los anticuerpos se purificaron de la yema de huevo de gallinas imunizadas mediante dilución en agua, seguida de precipitación con sulfato de amonio al 60% y afinidad tiofilica. Los anticuerpos fueron evaluados mediante inmunoblot empleando la proteína His-GiNMNAT. De una yema de huevo se obtuvieron 14,4 mg de IgYs, con alta pureza y con un reconocimiento de hasta 15ng de His-GiNMNAT. Se mejoró la especificidad de los IgYs mediante una purificación adicional por afinidad al antígeno, lo cual permitiría su empleo para el reconocimiento de la proteína del parásito.

In contrast with other animal models, the use of hens for polyclonal antibodies production not only reduces animal intervention, but also increases the quantity of the obtained immunoglobulins. The phylogenetic distance between birds and mammals, leads to more specific avian antibodies than their mammalian counterparts. Since a large amount of antigen is required for avian antibody production, the use of recombinant proteins for this procedure has been growing faster over the last years. Nevertheless, recombinant protein production through heterologous systems, frequently leads to the formation of insoluble and useless aggregates (inclusion bodies, IC). This article presents a strategy to produce avian polyclonal antibodies (IgYs) from IC. In order to obtain the antigen, the Giardia intestinalis nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase recombinant protein (His-GiNMNAT) was expressed in Escherichia coli. The His-GiNMNAT protein was purified through IC solubilization and re-folding. The purified protein was use to immunize hens. The antibodies were purified from egg yolk by water dilution, followed by ammonium sulfate precipitation and thiophilic affinity chromatography. Specificity of the purified antibodies was tested against the His-GiNMNAT protein through Western blot essays. In terms of yield, 14.4 mg of highly pure IgYs were obtained from one egg yolk; these antibodies were able to detect 15 ng of antigen. IgYs specificity was improved by means of antigen affinity purification, allowing its implementation for endogenous detection of GiNMNAT protein in G. intestinalis.

A utilização de galinhas para a produção de anticorpos policlonais, diminui a intervenção sobre o animal e permite a geração de grandes quantidades de anticorpos. As aves têm maior distância filogenética entre os seus antígenos em comparação com os mamíferos, oferecendo altos porcentagens de anticorpos específicos. A produção de anticorpos requerem quantidades consideráveis de antigénio, por conseguinte, é comum a utilização de proteínas recombinantes para esta finalidade. No entanto, a produção de proteínas em sistemas heterólogos muitas vezes leva à precipitação em agregados insolúveis de utilidade limitada (corpos de inclusão). Este trabalho apresenta uma metodologia para a produção de anticorpos policlonais, utilizando proteína recombinante a partir de corpos de inclusão. O antígeno utilizado foi a proteína Nicotinamida / Nicotinato Mononucleótido Adenililtranferasa de Giardia intestinalis gerada em Escherichia coli (His-GiNMNAT). A purificação do antigénio foi feita por solubilização e renaturalização. Os anticorpos foram purificados a partir da gema de ovo de galinhas imunizadas pelo método de diluição em água, seguido de precipitação com sulfato de amónio (60%) e afinidade tiofilica. Os anticorpos foram avaliados por imunoblot utilizando a proteína His-GiNMNAT. De uma gema de ovo foram obtidos 14,4 mg de IgYs com pureza elevada. Estes anticorpos podem reconhecer até 15 ng de His-GiNMNAT. A especificidade dos IgYs foi reforçada por outra purificação por afinidade pelo antigénio. Isto irá permitir a sua utilização para o reconhecimento da proteína do parasita.